Другие анализы с использованием моноклональных антител

Иммуноцитохимия используется для идентификации частей клетки при проведении фундаментальных исследований, а также при диагностике заболеваний. По существу, если вы можете создать антитело к чему-либо, то можете и определить его местоположение — в крови, в тканях или в клетке. Для этого делают срезы тканей и инкубируют их в растворе с антителами к антигену интереса. Антигеном может быть клеточный рецептор или другой специфический белковый продукт клетки. Антитело часто связано с флуоресцентным красителем, так что можно увидеть локализацию антигена. Когда антитело находит антиген и формирует с ним комплекс, свободные антитела отмывают, и флуоресцентный краситель остается в местах локализации антигена. Используя спектрофотометр или флуоресцентный микроскоп, можно выяснить локализацию флуоресцентного красителя, а следовательно, определить, где внутри клетки находится антиген.

Еще одним выгодным с коммерческой точки зрения применением этого метода является сортировка клеток. Представьте такую ситуацию. Вы — патоморфолог, обученный узнавать едва различимые изменения в морфологии, которые характерны для клеток больного ревматоидным артритом. Чтобы найти эти клетки, используя старые методы, вам бы пришлось собрать образцы крови, сконцентрировать клетки, приготовить окрашенные препараты этих клеток и провести многие часы, просматривая препараты в поисках предательских клеток. Подумайте о времени и деньгах, которые можно было бы сэкономить, если бы вы могли пометить эти клетки маркером, распознаваемым компьютером, и запрограммировать компьютер на их поиск. Без сомнения, компьютер проанализировал бы намного больше клеток, чем смогли бы проанализировать вы в силу стоящих перед вами ограничений. Итак, мы только что описали сортировщик клеток.

Сортировщики, которые могут сортировать клетки, основываясь на их размерах и ряде других параметров (гранулированности), уже некоторое время доступны для применения. Эти сортировщики используют лазерные детекторы и компьютерные технологии для анализа лазерных сигналов. Чтобы выявить клетки, пораженные при ревматоидном артрите, вам понадобится найти антиген, специфичный для этих клеток, и создать моноклональные антитела к данному антигену. Как только вы получите моноклональные антитела, можно будет присоединить к антителу флуоресцентный краситель. Затем смешайте исследуемую кровь с мечеными моноклональными антителами и направьте в сортировщик клеток с детектором для флуоресцентного красителя (рис. 6.5). Вот и все!

Использование связанных с флуоресцентной меткой моноклональных антител для выявления клеток, пораженных ревматоидным артритом

Рис. 6.5. Использование связанных с флуоресцентной меткой моноклональных антител для выявления клеток, пораженных ревматоидным артритом

Лигандом называют вещество, которое может быть использовано для выделения определенных молекул из раствора благодаря образованию комплекса. Специфические антитела — превосходные лиганды. Вы можете использовать антитела на твердом матриксе, чтобы связывать (очищать или удалять) антиген. Например, представьте исследователя, который хочет изучить белок, связанный с определенным типом лимфомы. Можно изолировать этот белок из крови больных лимфомой, приготовив длинную колонку, наполненную шариками, покрытыми антителами к этому белку. Если пропустить кровь через такую колонку, антитела свяжут антиген. Вы можете использовать химические методы, чтобы затем отделить антиген и получить чистый образец с искомой молекулой. Технологии с применением антител могут быть использованы для детоксикации растворов или очистки от веществ-загрязнителей. Вы также можете применить антитела против иммуноглобулина для очистки растворов антител.

В некоторых экспериментальных методиках моноклональные антитела применяются, например, для выявления определенных типов рака. Можно использовать антитела, меченные короткоживущим радиоизотопом, обладающим высокой энергией. Маркировка включает инкубирование клеток, вырабатывающих антитела, с соединением, которое входит в состав антитела и доступно в радиоактивной форме, или в форме изотопа. Радиоактивные антитела затем инъецируют пациенту. Прибор, называемый гамма-камерой, применяют для фотографирования радиоактивной ткани в живом пациенте. В данном случае важна способность антител быстро проникать в ткань, что делает заманчивым использование Fab-фрагментов, а не целых антител. Кроме того, Fab-фрагменты не имеют рецептора для белков системы комплемента, что снижает вероятность возникновения воспалительной реакции.

Срубы из бруса срубы домов из бруса.
Маникюр галерея аэропорт салон красоты gentille метро аэропорт.

Оставить комментарий

Ваш комментарий