Другие анализы с использованием моноклональных антител

Иммуноцитохимия используется для идентификации частей клетки при проведении фундаментальных исследований, а также при диагностике заболеваний. По существу, если вы можете создать антитело к чему-либо, то можете и определить его местоположение — в крови, в тканях или в клетке. Для этого делают срезы тканей и инкубируют их в растворе с антителами к антигену интереса. Антигеном может быть клеточный рецептор или другой специфический белковый продукт клетки. Антитело часто связано с флуоресцентным красителем, так что можно увидеть локализацию антигена. Когда антитело находит антиген и формирует с ним комплекс, свободные антитела отмывают, и флуоресцентный краситель остается в местах локализации антигена. Используя спектрофотометр или флуоресцентный микроскоп, можно выяснить локализацию флуоресцентного красителя, а следовательно, определить, где внутри клетки находится антиген.

Еще одним выгодным с коммерческой точки зрения применением этого метода является сортировка клеток. Представьте такую ситуацию. Вы — патоморфолог, обученный узнавать едва различимые изменения в морфологии, которые характерны для клеток больного ревматоидным артритом. Чтобы найти эти клетки, используя старые методы, вам бы пришлось собрать образцы крови, сконцентрировать клетки, приготовить окрашенные препараты этих клеток и провести многие часы, просматривая препараты в поисках предательских клеток. Подумайте о времени и деньгах, которые можно было бы сэкономить, если бы вы могли пометить эти клетки маркером, распознаваемым компьютером, и запрограммировать компьютер на их поиск. Без сомнения, компьютер проанализировал бы намного больше клеток, чем смогли бы проанализировать вы в силу стоящих перед вами ограничений. Итак, мы только что описали сортировщик клеток.

Сортировщики, которые могут сортировать клетки, основываясь на их размерах и ряде других параметров (гранулированности), уже некоторое время доступны для применения. Эти сортировщики используют лазерные детекторы и компьютерные технологии для анализа лазерных сигналов. Чтобы выявить клетки, пораженные при ревматоидном артрите, вам понадобится найти антиген, специфичный для этих клеток, и создать моноклональные антитела к данному антигену. Как только вы получите моноклональные антитела, можно будет присоединить к антителу флуоресцентный краситель. Затем смешайте исследуемую кровь с мечеными моноклональными антителами и направьте в сортировщик клеток с детектором для флуоресцентного красителя (рис. 6.5). Вот и все!

Использование связанных с флуоресцентной меткой моноклональных антител для выявления клеток, пораженных ревматоидным артритом

Рис. 6.5. Использование связанных с флуоресцентной меткой моноклональных антител для выявления клеток, пораженных ревматоидным артритом

Лигандом называют вещество, которое может быть использовано для выделения определенных молекул из раствора благодаря образованию комплекса. Специфические антитела — превосходные лиганды. Вы можете использовать антитела на твердом матриксе, чтобы связывать (очищать или удалять) антиген. Например, представьте исследователя, который хочет изучить белок, связанный с определенным типом лимфомы. Можно изолировать этот белок из крови больных лимфомой, приготовив длинную колонку, наполненную шариками, покрытыми антителами к этому белку. Если пропустить кровь через такую колонку, антитела свяжут антиген. Вы можете использовать химические методы, чтобы затем отделить антиген и получить чистый образец с искомой молекулой. Технологии с применением антител могут быть использованы для детоксикации растворов или очистки от веществ-загрязнителей. Вы также можете применить антитела против иммуноглобулина для очистки растворов антител.

В некоторых экспериментальных методиках моноклональные антитела применяются, например, для выявления определенных типов рака. Можно использовать антитела, меченные короткоживущим радиоизотопом, обладающим высокой энергией. Маркировка включает инкубирование клеток, вырабатывающих антитела, с соединением, которое входит в состав антитела и доступно в радиоактивной форме, или в форме изотопа. Радиоактивные антитела затем инъецируют пациенту. Прибор, называемый гамма-камерой, применяют для фотографирования радиоактивной ткани в живом пациенте. В данном случае важна способность антител быстро проникать в ткань, что делает заманчивым использование Fab-фрагментов, а не целых антител. Кроме того, Fab-фрагменты не имеют рецептора для белков системы комплемента, что снижает вероятность возникновения воспалительной реакции.


Оставить комментарий

Ваш комментарий