Иммуноферментный твердофазный анализ (ELISA)

Развитие технологий применения моноклональных антител значительно улучшило нашу способность диагностировать ряд человеческих заболеваний. Используя антитела против специфической мишени, мы можем обнаружить малые количества антигенов или антител, которые появляются в человеческом организме при той или иной болезни. Наличие антител — очень чувствительный показатель присутствия антигена. Антиген может быть связан с бактерией, вирусом или компонентом человеческого организма, против которого иммунная система ошибочно осуществляет защитную реакцию (как, например, при аутоиммунном заболевании).

Рассмотрим такую проблему. Вы хотите узнать, имеет ли пациент определенный антиген в своем организме. Вы подозреваете развитие стрептококковой инфекции и хотите сделать быстрый анализ. Вы знаете, что пациент со стрептококковой инфекцией будет носителем стрептококковых антигенов. В настоящее время для анализа моноклональных антител широко используется метод, называемый ELISA (Enzyme-Linked immunosorbent Assay) — иммуноферментный твердофазный анализ. Это метод выявления формирования иммунокомплекса — соединения антитела с антигеном. Вам необходимо использовать следующие составляющие:

• антитела к антигену интереса, связанные с субстратом;
• кровь пациента, содержащая антиген;
• свободные антитела к антигену интереса, связанные с ферментом, который будет реагировать с окрашенным субстратом.

Иммуноферментный твердофазный анализ

Рис. 6.4. Иммуноферментный твердофазный анализ

При ELISA антитело, закрепленное на пластиковой подложке, «подбирает» антигены, присутствующие в крови пациента (рис. 6.4). Затем добавляют антитела, связанные с ферментом. Антиген будет образовывать комплекс с новым антителом, связываясь с ним в участке, отличающемся от участка связывания с антителом, фиксированным на подложке. Связанное с ферментом антитело, которое не связалось с антигеном, будет вымываться. Оставшиеся молекулы сформируют «сэндвич», состоящий из следующих слоев: фиксированное антитело — антиген — связанное с ферментом антитело. Этот «сэндвич» подвергают действию субстрата, который будет расщепляться ферментом. Расщепление приведет к изменению окраски субстрата. А по изменению окраски субстрата мы узнаем о присутствии антигена.

Данная технология лежит в основе методов быстрого выявления стрептококковых инфекций, а также экспресс-тестов на беременность.

Есть и другие условия, при которых антиген может не циркулировать в крови или присутствовать в организме человека в ничтожно малых количествах. Примером является вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), при заражении которым в течение длительного периода антиген депонируется внутри клеток жертвы. Другим примером низкого содержания антигена является случай, когда необходимо выявить антигены у жертв аутоиммунных заболеваний. Так, у ребенка с риском диабета необходимо выявить, имеет ли он антитела, наличие которых говорит о развитии иммунного ответа на собственные инсулин-вырабатывающие клетки. Напомним: однажды активированные присутствием антигена В-лимфоциты продолжают вырабатывать антитела, хотя и во все меньшем и меньшем количестве. Обнаружение циркулирующих антител — очень чувствительный тест на присутствие антигена в организме. В этом случае необходимо использовать модификацию ELISA, при которой антиген присоединяется к субстрату, а кровь пациента, содержащая антитела, контактирует с субстратом. Чтобы обнаружить формирование этого иммунокомплекса, нам понадобится другое антитело, соединенное с ферментом. Данное антитело (anti-human antibody) сконструировано таким образом, что реагирует с любым человеческим антителом. Оно присоединяется к антителам, соединенным с антигеном, просто потому, что это человеческие антитела. Избыток антител вымывается. Когда второе антитело присоединяется, фермент разрушает субстрат, так что вы можете видеть иммунокомплекс. Это другой «сэндвич»!

Но необходимо быть осторожными: для большинства анализов необходимо найти компромисс между чувствительностью и точностью метода, основываясь на дальнейшем использовании полученных результатов. В случае вируса иммунодефицита человека необходимо быть уверенными, что вы не сообщаете пациенту, что анализ показал ВИЧ-отрицательную реакцию, в то время как на самом деле она ВИЧ-положительная. Анализ на ВИЧ очень чувствительный, но склонен давать ложные положительные пробы. Окончательное установление наличия ВИЧ-инфекции требует повторения теста или проведения дополнительных более точных тестов.

мыло одноразовое web-магазин персональный

Оставить комментарий

Ваш комментарий