Рекомбинантные технологии и расшифровка ДНК. Заключение.

Наиболее существенной технологией в биотехнологической революции является способность копировать ген из одного организма и поместить его в другой организм. И что наиболее замечательно, такая процедура может быть проделана между организмами различных видов, родов, семейств и типов.

Откуда вы берете гены? Существует метод, позволяющий по структуре мРНК восстановить последовательность нуклеотидов в молекуле ДНК, используя фермент, называемый обратной транскриптазой. мРНК — это молекула, осуществляющая перенос генетического кода с ДНК к «фабрике» по производству белка, рибосоме. мРНК можно выделить из клеток, в которых, как вы ожидаете, экспрессируется нужный ген. Как только вы получили ген, можно определить последовательность оснований, используя ряд аналитических методов. Они включают использование ДНК-проб, которые флуоресцируют или испускают радиоактивное излучение, соединяясь с комплементарной последовательностью, а также применение рестриктаз для нарезания последовательности на фрагменты и гель-электрофореза для разделения фрагментов ДНК в соответствии с их размером. Зная последовательность нуклеотидов в ДНК, вы можете создать ген, используя синтезатор ДНК. Получив немного нужной ДНК, вы можете «размножить» (амплифицировать) ее, используя полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

Чтобы поместить ген в другой организм, вам нужен вектор. Этим вектором может служить плазмида, вирус или искусственная хромосома. Искусственная хромосома имеет центромеру посередине и теломеры с обоих концов. Благодаря виду — источнику центромеры и теломеры искусственная хромосома имеет видовую специфичность. Теперь в нашем распоряжении есть бактериальные, дрожжевые, мышиные и человеческие искусственные хромосомы. Искусственную хромосому сравнивают с «генетической кассетой», которую просто вставляют в реципиента, и она начинает работать как естественная хромосома. При необходимости вставить ген в существующий вектор вы используете рестриктазы. Рестриктазы разрезают ДНК вектора, создавая зубчатый край, так что по концам фрагмента остаются участки с одноцепочечной нитью ДНК — так называемые «липкие концы», которые ищут комплементарные им основания. Вы можете присоединить «липкие концы» по краям последовательности гена, комплементарные «липким концам» векторной плазмиды. Если затем инкубировать их вместе в присутствии лигазы, то векторная плазмида присоединит новую ДНК. Обычно также нужно включить в вектор репортерный ген, который «сообщит», что включение нужного гена произошло. Если вы работаете с бактериями, то отберете те из них, которые обладают геном устойчивости к ампициллину и популярным репортерным геном бета-галактозидазы. Бактерии, содержащие бета-галактозидазу, будут вызывать изменение окраски среды, на которой растут. Чтобы подтвердить, что необходимый белок синтезируется в бактериях, можно использовать специфичные к данному белку моноклональные антитела, соединенные с флуоресцентной или радиоактивной меткой.

На сайте premier-parfum-pp.ua представлены моно духи на вас изысканный вкус.

Оставить комментарий

Ваш комментарий