Технология использования репортерных генов

Репортерные гены используются, когда вы изучаете ген, но нет четкой возможности проверить, экспрессируется он или нет. Репортерные гены активны, когда исследуемый ген активен. Исследуемые системы включают вирусную ДНК и мутантные гены. Некоторые репортерные гены отвечают за синтез белка, который легко выявить. Например, ген, кодирующий бета-галактозидазу. Вета-галактозидаза вызывает изменение окраски среды, что было описано выше. Другим популярным репортерным геном является ген, кодирующий зеленый флуоресцентный белок (GFP). Репортерный ген связывают с определенным исследуемым событием в клетке, например влиянием человеческого гормона роста на клетку. Репортерный ген соединяют с промотером, чувствительным к наличию человеческого гормона роста. Когда гормон оказывает влияние на клетку, наблюдается флуоресценция. Это просто потрясающая картина — клетки буквально сияют зеленым светом.

Еще один вариант использования репортерных генов — отслеживание передвижения белков. В поистине красивых исследованиях по изучению нормального и аномального метаболизма рецептора рилизинг-фактора гонадотропного гормона ученые присоединили ген GFP к гену рецептора. Таким образом, они могли наблюдать, где в клетке локализуется данный белок, по зеленой флуоресценции. В этом замечательном исследовании было показано, что если структура белка неправильна в результате нарушенного фолдинга, он накапливается в люмене эндоплазматического ретикулума. Правильно свернутые белки встраивались в мембрану клетки и были обнаружены на поверхности клетки. Ген GFP может заставить светиться целый организм. Вы можете увидеть фотографии флуоресцирующих мышей!

Часто используемым и очень мобильным репортером является люцифераза, кодируемая ДНК светлячков (рис. 7.16).

Создание рекомбинантной люциферазы

Рис. 7.16. Создание рекомбинантной люциферазы


Оставить комментарий

Ваш комментарий